GREEN FLUORESCENT PROTEIN (GFP), SUATU SIGNAL PENANDA QUANTITATIF UNTUK MEMONITOR PROLIFERASI SEL

Puji Astuti, Leonore de Boer, Noelle-Anne Sunstrom, Peter P. Gray

Abstract


Banyak penelitian sel kultur yang melibatkan sejumlah besar sampel untuk dianalisis, baik yang berhubungan dengan pertumbuhan sel atau toksisitas senyawa terhadap sel. Green Fluorescent Protein (GFP) adalah suatu protein yang secara alami dapat berfluorescence dan banyak digunakan pada berbagai aplikasi seperti penanda untuk ekspresi gena, produksi heterologous protein atau monitoring efisiensi transfeksi. Penelitian ini bertujuan untuk membandingkan tingkat akurasi, taraf kepercayaan dan reprodusibilitas GFP untuk memonitor pertumbuhan sel.

Kurva baku dibuat dengan serial dilusi sel CHO-K1-EGFP dalam media 10% FCS di 96 well plate. Jumlah sel dalam tiap sumuran dihubungkan dengan signal fluorescence. Untuk memonitor pertumbuhan sel, signal fluoresensi dibandingkan dengan metode Trypan Blue Exclusion yang jumlah sel dalam tiap sumuran dihitung selama periode waktu tertentu (n=3). Untuk monitoring pertumbuhan sel, signal dari GFP memperlihatkan korelasi yang baik dengan jumlah sel dengan tingkat linieritas 0,9866 dalam kisaran jumlah sel 1250 – 1 x 105 sell/sumuran (standar error maksimum 11%). Metode ini terbukti memungkinkan pengukuran langsung signal fluoresensi sehingga mampu menurunkan kemungkinan kesalahan yang terjadi pada saat preparasi sel yang dapat mempengaruhi akurasi data yang diperoleh. Sekali klones permanen (stable clones) diperoleh klons ini dapat digunakan untuk banyak aplikasi.

Kata Kunci: Green Fluorescent Protein (GFP), Fluorescence, proliferasi sel, Trypan Blue Exclusion


Full Text:

Untitled

References


Albano, C.R., Randers-Eichhorn, L., Bentley, W.E. and Rao, G., 1998, Green Fluorescent Protein as a Real Time Quantitative Reporter of Heterologous Protein Production, Biotechnology Progress, 14: 351-354.

Bailey, C.G., Baig, M., Gray, P.P., Sunstrom, N.A., 1999, A Rapid Selection/Amplification Procedure for High Level Expression of Recombinant Protein in A Metal Amplifiable Mammalian Expression System, Biotechnology Techniques, 13: 615-619.

Chalfie, M., Tu, Y., Euskirchen, G., ward, W.W., Prasher, D.C., 1994, Green Fluorescence Protein as a marker for Gene Expression. Science, 263: 802-805.

Freshney, R.I., 1994, Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique, 3rd Ed.. Wiley-Liss, New York, 268-270, 274-275.

Gubin A.N., Reddy, B., Njoroge, J.M. and Miller, J.L., 1997, Long-term, Stable Expression of Green Fluorescent Protein in Mammalian Cells, Biochemical and Biophysical Research Communication, 236: 347-350.

Hunt, L., Jordan, M., De Jesus, M., and Wurm, F.M., 1999, GFP-Expressing Mammalian Cells for Fast, Sensitive, Non-invasive Cell Growth Assessment in a Kinetic Mode. Biotechnology and Bioengineering, 65 (2): 201-205.

Prasher, D.C., Eckenrode, V.K., Ward, W.W., Prendergast, F.G., and Cormier, M.J., 1992, Primary Structure of the Aequorea victorie Green Fluorescence Protein, Gene, 111: 229-233.




DOI: http://dx.doi.org/10.14499/indonesianjpharm0iss0pp169-173

Refbacks

  • There are currently no refbacks.




Copyright (c) 2017 INDONESIAN JOURNAL OF PHARMACY

Creative Commons License
This work is licensed under a Creative Commons Attribution-ShareAlike 4.0 International License.

Indonesian J Pharm indexed by:

                                    
 
web
analytics View My Stats